【关键词】 葫芦巴属； 脂肪肝，酒精性； 大鼠 Therapeutic effects of Trigonella foenum-greacum saponin on rats with alcoholic fatty livers ZHANG Yan-zhi, ZHANG Yu, LI Lin-lin, YANG Wei-xing, RAN Xin-jian, YANG Yong-xin, MAO Xin-min. 【Key words】 Trigonella; Fatty liver, alcoholic; Rats 【First author抯 address】 Department of Pharmacology, Xinjiang Medical University, Wulumuqi 830054, China Corresponding author: MAO Xin-min, Email: mxm3277@sohu.com 据不完全统计，我国部分地区成人脂肪性肝病的发病率已高达10%～20%；脂肪性肝病已经不再被认为是良性静止性病变，其纤维化的发生率高达25%，且约1.5%～8.0%的患者可发展为肝硬化，已成为较严重的医学和社会问题[1]。本研究通过构建大鼠酒精性脂肪肝模型，研究葫芦巴总皂苷（TFGs）对酒精性脂肪肝的治疗作用。 一、材料与方法 1. 实验动物：健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，体重（180±20）g，由新疆医科大学实验动物中心提供。 2. 主要试剂与仪器：TFGs干燥粉末，昌吉卫生学校药学组提供；复合水飞蓟片内含大豆磷脂、水飞蓟提取物、维生素E，重庆正邦生物制品有限公司生产；天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、白蛋白（Alb ）试剂盒购自上海荣盛生物技术有限公司；总胆红素（TBil）试剂盒上海复旦张江医药股份有限公司生产；γ-谷氨酰转肽酶（GGT）试剂盒购自上海复兴长征医学科学有限公司；脂联素试剂盒美国Bionewtrans pharmaceutical biotechnology有限公司生产；红星二锅头白酒（55。），北京酿酒总厂生产；猪油自制；TGL 3．实验方法：正常组大鼠8只等渗盐水灌胃，其余大鼠40只每天下午灌胃给予酒脂混合乳液（酒∶脂=3∶2），剂量15ml.kg-1.d-1，每3d增加2.5ml.kg-1.d-1至25ml.kg-1.d-1之后保持此量灌胃。10周后病理结果显示造模成功（诊断标准参照文献[2]）后将大鼠按雌雄、体重均衡再随机分为5组，每组8只。模型组；对照组，水飞蓟片300mg.kg-1.d-1；A组（TFGs小剂量组），TFGs 60mg.kg-1.d-1；B组（TFGs中剂量组），TFGs 90mg.kg-1.d-1；C组（TFGs大剂量组）TFGs 120mg.kg-1.d-1。对照组、A、B、C组上午给药，下午继续给予酒脂混合乳液灌胃。4周后，各组大鼠禁食12h，称重后摘眼球取血，脱颈椎处死，迅速取出肝脏称重。剪取各大鼠肝脏同一部位 4. 统计学处理：将所有数据输入Excel数据库，采用SPSS10.0统计软件包完成。计量资料用x-±s表示，采用单因素方差分析,检验水准α＝0.05。 二、结果 1．TFGs对酒精性脂肪肝大鼠HI、肝脏脂质的影响：模型组肝脏HI显著升高，TFGs能使升高的HI降低。酒精性脂肪肝模型组大鼠肝细胞内TG、TC含量比正常组明显升高；TFGs能显著降低大鼠肝细胞TC、TG含量，见表1。 2．各项血脂指标测定结果：模型组的血清TC、TG、HDL-C、LDL-C含量较正常组显著增加；TFGs能显著降低酒精性脂肪肝模型大鼠血清TC、LDL-C，但TFGs大剂量能显著升高血清TG水平。对照组水飞蓟片能显著降低血清TC、LDL-C，血清TG无明显变化，见表2。 3.肝功能等指标变化情况：模型组大鼠血清TBil、Alb水平及ALT、AST活性明显升高，TFGs能显著降低AST、ALT活性和血清TBil含量，使升高的Alb水平恢复正常，大剂量可使GGT水平显著降低。对照组能显著降低AST、Alb、ALT，见表3。 4．病理学变化：正常肝组织外观红褐色，质软富弹性。光镜下观察肝小叶结构正常，肝细胞形态大小正常，肝索排列整齐，核圆，位于细胞中央，胞质均匀，见图1。模型组大鼠肝脏色泽稍泛黄，肝脏肿大，边缘钝厚，质脆。镜下可见肝细胞弥漫性水肿明显，细胞质内出现大量大小不等脂肪空泡（后期大泡脂滴多），细胞核被挤向周边，部分肝细胞出现点状坏死，有较多嗜中性白细胞浸润, 见图2。TFGs治疗小剂量组可使脂变细胞较模型组明显减少，可见少量小脂滴，见图3。大剂量组肝细胞几乎恢复正常,见图4。对照组对肝脏病理状况改变不明显, 见图5。 5．TFGs 对酒精性脂肪肝大鼠脂联素的影响：模型组血清脂联素水平与正常组比较明显下降，TFGs各给药组和对照组能显著升高大鼠血清脂联素水平，见表4。 三、讨论 水飞蓟素具有稳定肝细胞膜、抗自由基和脂质过氧化、刺激蛋白质合成及促进损伤后肝细胞的再生、调血脂作用[3]。本实验结果显示其调血脂作用主要为降低血清TC、LDL-C水平，对减少肝中已沉积甘油三酯无明显作用。 葫芦巴为豆科植物葫芦巴的成熟干燥种子，又名香豆子、香苜蓿、芦巴子，性温无毒，是一种传统中药材及维吾尔特色药材,也是西部地区少数民族常用食品和香料。葫芦巴提取物TFGs能抑制酒精诱导的细胞色素P450 CYP2E1的表达，提高肝细胞中谷胱甘肽含量，降低脂质过氧化产物丙二醛含量。本研究结果显示：TFGs能降血脂、降酶保肝、显著减少肝脏中沉积的脂质，因此对大鼠酒精性脂肪肝具有一定的治疗作用。其机制可能是通过减轻乙醇及其代谢产物乙醛，经CYP2E1代谢过程诱导的脂质过氧化状况，提高机体抗氧化能力，改善肝细胞线粒体功能，通过升高脂联素水平，激活磷酸腺苷依赖蛋白激酶和过氧化物酶体增殖物受体-α信号转导通路[4]。抑制肝细胞脂肪酸合成的两个关键酶：乙酰辅酶A羧化酶、脂肪酸合成酶的活性，减少脂质生成，同时激活线粒体肉碱脂酰转移酶，增强脂肪氧化作用，从而减少肝脏脂肪沉积[5]。模型组白蛋白水平升高，而各给药组恢复正常，可能是由于模型组高脂血清引起测定结果假阳性增高。对照组水飞蓟使肝TG含量升高，可能是促进了血清TG向肝脏转移。TFGs减少肝脏脂质的具体分子靶点，尚待进一步研究。 参 考 文 献 1Lu LG, Fan JG. A report from the 2nd Symposium on Fatty Liver Diseases.Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2005, 13: 628-629. 陆伦根，范建高.第二届全国脂肪性肝病专题研讨会会议纪要.中华肝脏病杂志,2005,13:628-629. 2Fatty Liver and Alcoholic Liver Disease Study Group of Chinese Liver Disease Association. Diagnostic criteria of alcoholic liver disease.Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2003, 11: 72. 中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组. 酒精性肝病诊断标准.中华肝脏病杂志,2003,11:72. 3Tan HR, Wu Q, Pan JQ, et al. Effects ant mechanism of silibinin on antagonizing alcoholic fatty liver in rats.Zhongguo Linchuang Yaolixue Yu Zhiliaoxue, 2004, 9: 803-806. 谭海荣,吴谦,潘竞锵,等.水飞蓟宾对抗大鼠酒精性脂肪肝作用及机制.中国临床药理学与治疗学,2004,9:803-806. 4Xu A, Wang Y, Keshaw H, et al. The fat derived hormone adiponectin alleviates alcoholic and nonalcoholic fatty liver diseases in mice. J Clin Invest, 2003, 112: 91-100. 5You M,Crabb DW.Recent advances in alcoholic liver disease II.Minireview:molecular mechanisms of alcoholic fatty liver. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2004,287:G1-6.
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