【摘要】目的探讨慢性丙型肝炎患者自身抗体检测的临床意义。方法应用ELISA方法检测117例慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体，并比较其与HCV RNA、肝硬化发生率、年龄、性别的关系。结果117例慢性丙型肝炎患者中有55例至少有1项自身抗体阳性，总阳性率为47.00%，明显高于健康对照组（6.66%，P<0.01）。HCV RNA阳性组与HCV RNA阴性组自身抗体的检出率无显著性差异（P>0.05）。自身抗体阳性组中丙型肝炎肝硬化发生率（40/55）明显高于自身抗体阴性组(31/62)(P<0.01)。自身抗体阳性组中≥40岁的患者比例明显高于自身抗体阴性组（P<0.05）。两组间性别比较，差异无统计学意义。结论慢性丙型肝炎患者中普遍存在自身免疫现象，自身抗体的检出率与患者的年龄和肝硬化发生率明显相关。在常规诊疗中检测自身抗体，对于慢性丙型肝炎患者的诊断和治疗具有一定的指导意义。 【关键词】丙型肝炎; 丙型肝炎病毒; 自身抗体 Clinical significance of autoantibodies detection in patients with chronic hepatitis CLI Ying, XU Xin, LIU Pei, WANG Xuelian, WANG Guixin.Department of Clinical Laboratory, Shengjing Hospital, China Medical University, Shenyang 110004, China 【Abstract】ObjectiveTo investigate the clinical significance of autoantibodies detection in patients with chronic hepatitis C.MethodsSera from 117 consecutive patients with chronic hepatitis C were investigated for the presence of autoantibodies by ELISA, and the correlations with HCV RNA， cirrhosis, age, and gender.Results55 of 117(47.00%) patients were positive for at least one autoantibody. The positive rates were much higher than that of healthy control (P<0.01). Distribution of the autoantibodies showed no differences between HCV RNA positive and negative groups (P>0.05). The cirrhosis prevalence rate in autoantibody positive group (40/55) were significantly higher than that of negative group (31/62)(P<0.01). The number of patients aged ≥40 in autoantibody positive group were much more than that of negative group (P<0.05). There was no significant difference between males and females in autoantibody positive rate.ConclusionThe autoimmune manifestations are existed commonly in patients with chronic hepatitis C. The positive rate of autoantibody is correlated with age and cirrhosis.Detection of autoantibodies routinely may be help diagnosis and treatment of chronic hepatitis C patients. 【Key words】Hepatitis C; Hepatitis C virus; Autoantibody 丙型肝炎病毒(HCV）感染严重威胁人类健康，特别是与自身免疫的关系，已越来越受到人们广泛关注［1、2］。研究HCV感染与自身免疫的关系，将有助于探讨HCV发病机理，对于丙型肝炎的临床治疗具有重要的意义。本实验通过对117例慢性丙型肝炎患者血清中抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体（ASMA），抗线粒体抗体（AMA）和类风湿因子（RF）的检测，并比较其与HCV RNA、患者年龄、性别以及肝硬化发生率的关系，评价其在丙型肝炎诊断及治疗中的作用。 材料与方法 一、研究对象 117例慢性丙型肝炎患者血清均来自2002年1月—2005年1月期间我院传染科住院患者，其中男78例，女39例，年龄11～74岁（平均46.05岁）,诊断均符合2000年西安全国传染性肝炎会议修订的标准［3］。117例患者中丙型肝炎肝硬化患者71例。30例健康体检者（各类肝炎血清学指标均为阴性）作为对照组。 二、检测试剂 ASMA、AMA、ANA试剂均购自美国MARKET生物制品公司， RF试剂盒购自郑州博赛生物技术研究所。抗HCV 和HCV RNA的检测试剂均购自天津华美公司。 三、检测方法 HCV RNA的检测采用RT-PCR方法,常规提取血清RNA后,扩增HCV特定的片段(扩增仪为PE2400),经2%的琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察,出现特异条带者为阳性。抗HCV 、ASMA、ANA、AMA和RF的检测采用ELISA法，按照试剂盒说明书操作，在酶标仪450 nm波长处测定吸光度值(D)。 四、统计学方法 采用SPSS 10.0软件进行相关的统计学分析,实验结果计数资料用例数和%表示，显著性比较采用χ2检验。 结果 一、117例慢性丙型肝炎患者血清各种自身抗体检测结果 117例慢性丙型肝炎患者血清中共检出55例93项次自身抗体阳性，总阳性率为47.00%，其中ASMA阳性26例（22.22%），ANA阳性32例（27.35%）， RF阳性29例（24.78%），AMA阳性6例（5.12%），以ANA的检出率为最高,而健康对照组的检出率则分别为：ASMA阳性0例，ANA阳性1例（3.33%），RF阳性1例（3.33%），AMA阳性0例，总阳性率为6.66%。两组总阳性率比较，差异有非常显著统计学意义（χ2=30.56，P<0.01）。其结果见表1。表1（略） 二、慢性丙型肝炎患者血清自身抗体检出率与HCV RNA的关系 117例慢性丙型肝炎患者中有62例HCV RNA阳性，55例HCV RNA阴性，我们将其分为两组，对其自身抗体的检出率进行比较。HCV RNA阳性组中，检出31例49项次自身抗体，其总检出率为50.00%，而HCV RNA阴性组中，检出24例44项次自身抗体，总检出率为43.63%，两者总检出率比较，χ2=0.45，P>0.05，差别无统计学意义。见表2。表2（略） 三、肝硬化发生率与自身抗体的关系 55例自身抗体阳性的丙型肝炎患者中有肝硬化40例（72.72%），自身抗体阴性组中有肝硬化 31例（50.00%），两组的肝硬化发生率比较，差异有非常显著统计学意义（χ2=6.80，P<0.01）（见表3） 。表3（略） 四、慢性丙型肝炎患者性别、年龄与自身抗体的关系 在自身抗体阳性组中≥40岁的患者有41例，占74.54%，在自身抗体阴性组中≥40岁的患者有33例，占53.22%，二组比较，差异显著（χ2=5.75,P<0.05）。男性患者自身抗体检出率为44.87%（35/78），女性患者自身抗体检出率51.28%（20/39），两组比较差异无统计学意义（χ2=0.46,P>0.05）（见表3）。 讨论 自1989年Esterban等［5］首次在自身免疫性肝炎患者血清中检出抗HCV以来，HCV感染与自身免疫的关系已引起众多学者的关注［6］。研究发现，慢性丙型肝炎患者血清中常可检测到ANA、ASMA、AMA、RF、抗DNA抗体等自身抗体，有的还可检测出自身免疫性肝炎标志性抗Ⅰ型肝肾微粒体抗体（LKMⅠ）。HCV感染诱发自身抗体与HCV感染B淋巴细胞及分子模拟机制有关［7］，Kammer等［8］也认为，自身免疫性疾病的启动因子是病毒感染，靶细胞中的抗原成分发生改变或者由于病毒蛋白质与正常组织成份间有同源性而诱发自身免疫，并认为HCV感染可通过分子模拟现象激活自身反应性CD8+T细胞，从而导致自身免疫。 关于慢性丙型肝炎患者中自身抗体的检出率的报道很多，但结果却不尽相同［9-12］。Buskila等［13］对90例HCV感染者进行了自身抗体的检测，发现69%的病人至少有1种自身抗体呈阳性反应，其中以RF阳性率最高（44%），本研究结果表明，慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体的总检出率为47.00%，其中ASMA、ANA，AMA和RF的阳性率分别为22.22%、27.35%，5.12%和24.78%,均显著高于健康对照组，且部分患者同时有2种和2种以上抗体同时存在，提示HCV感染可伴有自身免疫现象，但在HCV RNA阳性血清和HCV RNA阴性血清中，自身抗体的检出率无显著性差异（P>0.05）。HCV RNA阳性常提示病毒处于复制活跃期，这一结果表明HCV复制活跃期和静止期时患者出现自身抗体的概率无显著差异，说明HCV感染后的肝损伤并非HCV在肝细胞内直接繁殖作用的结果而可能由免疫损伤所致。通过比较不同年龄和性别患者自身抗体检出率，发现性别与抗体的检出率无关，而患者的年龄和肝硬化的发生率则与自身抗体的检出明显相关（P<0.05和P<0.01），这可能与肝硬化者病程更长，年长者病程更趋慢性化有关。上述研究结果表明，HCV感染者体内存在多种自身抗体，HCV感染可诱导自身免疫反应，且这种免疫反应与疾病的严重程度、病程长短有关。 虽然目前大多数学者认为HCV感染可诱导自身免疫，但仍有很多工作需要去做，如丙型肝炎伴自身免疫现象与自身免疫性肝炎（AIH）的鉴别，有学者认为，丙型肝炎伴自身免疫现象，其自身抗体的滴度常常很低，而高滴度（≥1∶320）的自身抗体常常提示自身免疫性肝炎的存在［14］，但也有学者报道在个别患者血清中，也可检测到高滴度的自身抗体［15］。另外干扰素已被公认为抗病毒的有效药物，被用于丙型肝炎的抗病毒治疗。但干扰素治疗往往能诱导或加重自身免疫现象［16］，若存在高滴度自身抗体时，用干扰素治疗，就会使病情恶化。相反，激素类可治疗自身免疫性疾病，但可使病毒复制增强，因此，对于慢性丙型肝炎伴有自身免疫现象，特别是有高滴度的自身抗体存在时，如何选择治疗方案就成为关键。这也提示我们，在慢性丙型肝炎的常规诊疗中不仅要检测自身抗体的存在，同时还要监测自身抗体滴度的高低，随时调整治疗方案。 参考文献 1刘文恩.丙型肝炎与自身免疫.国外医学生理、病理科学与临床分册，2000，20，321-323. 2Giordano N, Amendola A, Papakostas P,et al. Immune and autoimmune disorders in HCV chronic liver disease: personal experience and commentary on literature. New Microbiol，2005,28∶311-317. 3中华医学会传染病与寄生虫病学分会、病毒性肝炎防治方案.肝脏，2000，5∶257-263. 4Okamoto H, Sugiyama Y, Okada S, et al. Typing hepatitis C virus by polymerase chain reaction with Typespecific primers: application to clinical surveys and tracing infectious sources.J Gen Virol ,1992, 73；673-679. 5Esteban JI, Esteban R, Viladomiu L,et al. Hepatitis C virus antibodies among risk groups in Spain. Lancet，1989，2∶294-297. 6Squadrito G, Previti M, Lenzi M et al. High prevalence of nonorganspecific autoantibodies in hepatitis C virusinfected cirrhotic patients from southern Italy.Dig Dis Sci,2003，48∶349-53. 7Guadalupe Ercilla M, Vinas O. Extrahepatic symptoms of hepatitis C virus infection: relation to autoimmune response.Nephrol Dial Transplant,2000,15∶24-27. 8Kammer AR, van der Burg SH, Grabscheid B,et al. Molecular mimicry of human cytochrome P450 by hepatitis C virus at the level of cytotoxic T cell recognition. J Exp Med.1999,190∶169-176. 9Zusinaite E, Metskula K, Salupere R. Autoantibodies and hepatitis C virus genotypes in chronic hepatitis C patients in Estonia. World J Gastroenterol，2005,28∶ 488-491. 10Mahrous S, Mangoud A, Eissa M，et al. Autoantibodies in HCV infected patients at Sharkia Governerate.J Egypt Soc Parasitol，2004,34∶429-446. 11Agarwal N, Handa R, Acharya SK, et al. A study of autoimmune markers in hepatitis C infection. Indian J Med Res，2001,113∶170-174. 12吴赤红，徐小元，田庚善，等.慢性丙型肝炎患者血清自身抗体检测的研究.中华医学杂志，2006，86∶390-393. 13Buskila D, Shnaider A, Neumann L, et al. Musculoskeletal manifestations and autoantibody Profile in 90 hepatitis C virus infected Israeli patients. Semin Arthritis Rheum，1998,28∶107-113. 14王宵伟，王江滨，孟祥伟.自身免疫性肝炎与丙型肝炎伴自身免疫现象者抗体水平的比较与临床分析.中华肝脏病杂志，2004，12∶176-177. 15陈瀑.丙型肝炎患者肝特异性自身抗体的研究.重庆医科大学学报，2005，30∶116-117. 16Fabris P, Betterle C, Greggio NA, et al. Insulindependent diabetes mellitus during alphainterferon therapy for chronic viral hepatitis. J Hepatol，1998,28∶ 514-517. 上海《肝脏》杂志社版权 |